原核表达条件:原核表达实验步骤[朗读]

三个基本条件:具有能够正确转录的启动子,具有能够正常翻译的起始和终止信号,具有正确的开放阅读框.还需注意:原核生物的转录后及翻译后修饰与真核不同.ps.还需注意这个空我不太确定,因为原核表达系统和真核差的其实挺多的,只给一个空只能填最主要的了诺贝尔团队·鱼。

因为原核生物缺乏翻译后的修饰,所以表达的真核蛋白和真核中表达有所差异,可能没有生物学活性等,但是要是做免疫原应该没问题;基因需为cdna,不能含有内含子,原核细胞不能对mrna进行剪切;要分析dna序列信息,分析其密码子,由于原核与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而影响表达的情况;要注意你要表达蛋白的大小问题,一般情况下大于70kd的蛋白在原核菌种不容易表达或表大量低;原核表达出来的一般是包涵体,所以蛋白的复性很关键,否则表达出来了也不能用,没有活性。

应该是原核表达宿主菌比较准确原核表达宿主菌之前可以表达蛋白,放一段时间不表达蛋白原因很多首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。

第一,克隆到原核表达系统中的序列必须是去掉内含子的cdna序列.因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统.第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码。

使用genedesigner(dnatool2.0)非常经典不过你的蛋白不表达,很可能是形成了包涵体,这个是一个非常大的问题,更换可溶性表达标签是一个方法建议你去查一查文献。