细胞冻存条件:细胞的冻存过程[朗读]

细胞培养不用血清,冻存可以用无血清冻存液配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀冻存过程:消化贴壁细胞或收集悬浮细胞,将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟,弃上清液用一定量冻存液将细胞重悬,计数并调整细胞密度至100个每毫升左右将细胞悬液分装至2ml冻存管中,每管1ml并将冻存管口封,贴上标签做好记录降温:4度1小时,负20度1小时,负80度18小时或隔夜,液氮。

一、材料(一)仪器1.净化工作台2.离心机3.恒温水浴箱4.冰箱(4℃、-20℃、7.4%nahco38.dmso(分析纯)或无色新鲜甘油二、操作步骤(一)细胞冻存1.配。

细胞冻存1.取待冻存的细胞用胰酶消化(见相关实验细胞传代培养部分),用培养基将细胞冲洗下来.800r/min离心5min,弃上清收集细胞.如果是悬浮生长的细胞,则可直接离心收集细胞.2.加入适量冻存液(10%甘油+90%培养基,或者10%dmso+90%培养基)制成细胞悬液.细胞浓度宜大,3*106个/ml左右,并可适量增加牛血清浓度至20%.3.细胞悬液装入冻存管中.用胶布封裹,做好标记(写上细胞种类、时间及冻存条件等).4.冻存管在4℃下存放30min,转放-20℃1.5~2h,再转人-70℃4-12h后即可转移到液氮内(-196℃),注意进行登记。

注意:将细胞悬浮好之后,再加入dmso,加入dmso后,马上悬浮细胞,系入冻存管.4度过夜,放入液氮;如果没有液氮,-80度冻细胞不好。

(转载,仅供参考)1.37℃水浴预热培养液(huvec-004).2.从液氮中取出huvec的细胞管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要。