细胞冻存1.预先配制冻存液:10%dmso+90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,pbs冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.这是我实验中用的protocol,希望能够帮到你~。
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细胞冻存条件:细胞的冻存过程[朗读]
细胞冻存1.预先配制冻存液:10%dmso+90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,pbs冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.这是我实验中用的protocol,希望能够帮到你~。
在冻存管里加15%-30%的甘油保存,-20℃可以短期保存(1-2年),-80℃可以保存很久(10年左右)。
冻存细胞,应用液氮急冻,避免缓慢降温形成晶体破坏细胞结构,你这个做法,很匪夷所思.别等复苏了,现在赶紧拿出来活化,重新保存吧对你的补充:我拿北京大学生命科学院国家重点实验室的名义打赌,你那些师兄师姐全是错的,正好弄反了.正确的步骤是速冻、慢融——液氮速冻,冰上解冻.你们那做法,会有存活的细胞,但是一定比正确步骤少了很多,不信你试试。
细胞冻存管一般要耐低温-196℃,因为在常压下,液氮温度为-196℃;细胞冻存是细胞保存的主要方法之一.利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验.标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。