如果怀疑猴痘，卫生工作者应采集适当的样本并将其安全运送到具备适当能力的实验室。猴痘的确认取决于标本的类型和质量以及实验室检测的类型。因此，标本应按照国家和国际要求进行包装和运输。鉴于其准确性和敏感性，聚合酶链式反应 (pcr) 是首选的实验室测试。为此，猴痘的最佳诊断样本来自皮肤病变——囊泡和脓疱的顶部或液体，以及干燥的结痂。在可行的情况下，活检是一种选择。病变样本必须储存在干燥、无菌的试管中（无病毒运输介质）并保持低温。
由于正痘病毒具有血清学交叉反应性，抗原和抗体检测方法不能提供猴痘特异性确认。因此，不建议将血清学和抗原检测方法用于资源有限的诊断或病例调查。此外，最近或远程接种基于牛痘的疫苗（例如，在根除天花之前接种过疫苗的任何人，或由于高风险而最近接种过疫苗的人，例如正痘病毒实验室人员）可能会导致假阳性结果。
为了解释测试结果，提供患者信息和样本至关重要，包括：a) 发热日期，b) 皮疹发作日期，c) 样本采集日期，d) 个体当前状态（皮疹阶段），和 e) 年龄。